貝(bèi)克曼DNA純化試劑(jì)盒(hé)是根據(jù)氯化芐法(fǎ)構(gòu)建的,能(néng)夠從樣本(běn)中提取基因(yīn)組(zǔ)DNA的試劑(jì)盒(hé)。具(jù)有能(néng)將(jiāng)含(hán)有纖維素等的(dí)細胞壁(bì)中的羥(qiǎng)基苄基化,從而破(pò)壞(huài)細(xì)胞(bāo)壁(bì)的(dí)特性(xìng)。本製品利(lì)用了(liǎo)這一特(tè)性,將植物樣品凍結融(róng)解後(hòu),再(zài)使(shǐ)用(yòng)PipetTip的將(jiāng)植物(wù)樣品在Microtube壁(bì)上數次按(àn)壓即可破壞(huài)細胞(bāo)壁。本法(fǎ)與傳統(tǒng)方(fāng)法相(xiāng)比(bǐ),省去(qù)了(liǎo)液氮研(yán)磨等煩瑣步驟,有利於(yú)一次(cì)性處(chǔ)理大(dà)量樣品(pǐn)。而且,本製品(pǐn)經過了(liǎo)改良,熱(rè)處(chǔ)理(lǐ)時(shí)間隻(zhī)需15分鐘,使(shǐ)用本(běn)製(zhì)品(pǐn)從實驗開始至水(shuǐ)相回(huí)收隻需30分鐘時間(jiān)。得到的基因(yīn)組(zǔ)DNA可(kě)以進行(háng)PCR擴(kuò)增(zēng)及(jí)限(xiàn)製酶(méi)處理等。
全套(tào)操作約(yuē)需(xū)1小(xiǎo)時(shí),分匀漿(jiāng),細胞裂解,除(chú)蛋(dàn)白(bái),DNA純化等(děng)步驟(zhòu),詳細說明如下。
匀漿和細(xì)胞裂(liè)解(jiě):
使(shǐ)用(yòng)不(bù)同(tóng)的實(shí)驗材料(liào)需(xū)采用(yòng)不同的匀漿步(bù)驟,具體說明(míng)如下:
使(shǐ)用研缽(bō)進行匀漿時(shí):
①取(qǔ)1~100mg的動物組織或人組(zǔ)織移入冰浴預(yù)冷(lěng)的(dí)研缽中,快(kuài)速(sù)用力(lì)展研成匀漿。
注(zhù))下列組織(zhī)請(qǐng)加液氮(dàn)研磨至粉(fěn)末狀(zhuàng)。
A.富含(hán)DNA酶(méi)的胰髒,脾(pí)髒(zàng),胸(xiōng)腺,淋(lín)巴等(děng)組(zǔ)織(zhī)。
B.富含膠(jiāo)原蛋白的皮膚(fū),肌腱(jiàn)等組織(zhī)。
C.富(fù)含(hán)角質(zhì)蛋白(bái)的(dí)組織或(huò)堅硬的(dí)組織(如骨骼)等。
②加(jiā)入650μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1,溫和研磨(mó)30秒(miǎo)鐘。
注)使用上述①-注(zhù))的(dí)實驗材料時,請在(zài)加(jiā)入SolutionA及RNaseA1後(hòu),將(jiāng)研缽(bō)置於65℃水浴上研磨1分鐘。
③收集650μl研磨好(hǎo)的組(zǔ)織匀漿液(yè)移至CollectionTube中。如果匀漿體(tǐ)積(jī)不(bù)足650μl,請(qǐng)補充SolutionA至650μl,65℃保(bǎo)溫5分鐘(zhōng)。
使用(yòng)研磨(mó)棒進行匀漿時(shí):
①取(qǔ)1~100mg的(dí)動物組(zǔ)織或人(rén)組(zǔ)織移(yí)入冰(bīng)浴(yù)預(yù)冷的(dí)CollectionTube中,用(yòng)研(yán)磨棒(bàng)快(kuài)速研磨(mó)成糊狀(zhuàng)。
②加入(rù)350μl的SolutionA和0.9μl的(dí)RNaseA1後(hòu)用研磨棒快速(sù)研(yán)磨(mó)成匀漿(jiāng)。
③加入(rù)350μl的SolutionA將研磨棒上的(dí)匀(yún)漿衝入CollectionTube中,充分振蕩混合後,65℃保(bǎo)溫5分鐘(zhōng)。